傳統(tǒng)保護劑對細胞都有一定的毒害作用，研究人員發(fā)現(xiàn)了具有抗凍作用的新型保護劑：抗凍蛋白(AFP)[孔一6]和冰結(jié)合蛋白(IBF)[2卜29]。AFPs具有與冰晶結(jié)構(gòu)相似的性質(zhì)并且可以降低冰晶以針狀沿中心軸生長的速度，IBF則可以抑制再結(jié)晶，從而保護細胞膜[3引。
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目前廣泛使用的極地魚抗凍蛋白由于價格昂貴受到限制，而從微生物中提取抗凍蛋白可大大降低成本，其將成為研究的熱點并取代魚蛋白而占有市場。
雖然液氮超低溫保存體系的研究已經(jīng)較為深入、成熟，并且為自然資源的長期保存做出了重大的貢獻，但是仍然存在一些問題需要引起人們的關(guān)注。
(1)經(jīng)常使用的液氮是未經(jīng)滅菌的，將裝有材料的冷凍管浸入到液氮中時，液氮可能滲透到管中引起微生物污染[3嵋;
(2)微生物長期保存不僅要保證菌株的生理性狀還要保證遺傳信息的完整性，保藏過程中僅以活性指標判斷微生物是否保藏完好有些片面。StoychevaE3z]研究發(fā)現(xiàn)，將酵母菌Saccharornycescerevisi投入到液氮中進行快速冷凍無突變被誘發(fā)。
然而在4℃下預(yù)凍2 h，然后一10℃下冷凍1 h，再在一20℃下放置16 h的逐級降溫過程中易誘導(dǎo)線粒體rho一突變體生成。
同時，StamenovaE33]也發(fā)現(xiàn)慢速冷凍和逐級冷凍下，線粒體氧化磷酸化、超氧化物陰離子的積累導(dǎo)致基因組Tyl轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)移。然而研究者往往只重視存活率和生理生化性能的穩(wěn)定，卻忽視了對基因組變化及完整性的檢測。
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隨著分子生物學的發(fā)展，利用PCR、AFLP、RFLP等分子標記技術(shù)檢查基因組變化已經(jīng)成為可能。因此使用生理生化穩(wěn)定性和基因組完整性這個雙重指標評價一個保存方案的可行性是必要的。
